شناسایی جهش در ژن gdf9 و اثر آن بر صفات تولیدی و تولید مثلی در گوسفندان آرمان، ایران بلک و بلوچی

نرخ تخمک اندازی در پستانداران با کمپلکسی از جا به جایی سیگنال های هورمونی بین غده هیپوفیز و تخمدان از یک طرف، جا به جایی سیگنال های داخل فولیکول های تخمدانی بین اووسیت ها و سلول های سوماتیک اطراف اووسیت از طرف دیگر کنترل می شود. gdf9از اعضای خانواده بزرگ فاکتور های رشد بتا است که پروتئین کد شده توسط این ژن یکی ز مهمترین فاکتورهای رشد تخمدانی است که در رشد و تمایز فولیکول های اولیه تخمدانی نقش دارد. این پژوهش به منظور شناسایی جهش های موجود در ژن gdf9 در گوسفندان، آرمان، ایران بلک و بلوچی انجام گرفت. از تعداد 150 راس گوسفندان آرمان، ایران بلک و بلوچی نمونه خون تهیه و استخراج dnaبا استفاده از روش نمکی بهینه یافته صورت گرفت. کمیت و کیفیت dna استخراج شده با استفاده از روش طیف سنجی و الکتروفورز کنترل شد. با استفاده از دو جفت پرایمر اختصاصی یک قطعه 462 جفت بازی از ناحیه اگزون یک ژن gdf9 و یک قطعه 139 جفت بازی از ناحیه اگزون دو ژن gdf9 توسط واکنش زنجیره ای پلی مراز.(pcr) تکثیر و سپس هضم آنزیمی محصولات (pcr) با استفاده از آنزیم برشی haei برای جایگاه fecg1 ( قطعه 462 جفت بازی از اگزون یک) و آنزیمddei برای جایگاه fecgh (قطعه 139 جفت بازی از اگزون دو ژن gdf9) استفاده شد. نتایج حاصل از هضم آنزیمی وجود جهش را در اگزون یک ژن gdf9 تأیید نمود. آلل وحشی این ژن fecg+ با دو جایگاه برش قطعاتی به طول های 52، 156 و 254 جفت باز و آلل جهش یافته fecg1 با یک جایگاه برش قطعاتی به طول های 52 و410 جفت بازی ایجاد نمود. فراوانی آلل های fecg+ و fecg1به ترتیب در نژاد بلوچی 84 و 16 درصد، نژاد آرمان 77 و 23 درصد و نژاد ایران بلک 88 و 12 درصد و فراوانی هر یک از ژنوتیپ هایfecg+/fecg+ ، fecg+/fecg1 و fecg1/fecg1 در نمونه های تعیین ژنوتیپ شده به ترتیب در نژاد بلوچی 75، 19 و 6 درصد، در نژاد آرمان 59، 35 و 6 درصد و در نژاد ایران بلک 76، 24 و صفر درصد محاسبه شد. به منظور آزمون وجود یا عدم وجود تعادل از آزمون هاردی -واینبرگ استفاده شد که در نتیجه در جایگاه ژنی مورد مطالعه جمعیت گوسفندان آرمان و ایران بلک در تعادل اما جمعیت گوسفندان بلوچی در تعادل هاردی- واینبرگ قرار نداشتند. بررسی رابطه بین ژنوتیپ های مختلف ژن fecg1 با صفات تولیدی و تولید مثلی نشان داد که هیچ رابطه معنی داری بین این صفات و ژنوتیپ های مختلف ژن fecg1 وجود نداشت. نتایج حاصل از هضم آنزیمی ناحیه تکثیر شده اگزون دو ژن gdf9 با آنزیم برشی ddei عدم وجود جهش در این جایگاه ژنی را برای گوسفندان، آرمان، ایران بلک و بلوچی نشان داد و همه گوسفندان دارای ژنوتیپ وحشی بودند.